TTC染色实验简介与原理

　　一、TTC染色实验简介与原理

　　实验简介：TC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲臜，用来表示细胞的活力。配制多为2%，染色要避光，37度条件下，它是评价脑缺血损伤常用的指标。

　　实验原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。故可以用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。

　　TTC染色实验意义：通过TTC染色观察梗死病变及梗死体积。

　　二、TTC染色结果分析

　　动物组织：非梗死区染为红色，梗死区呈灰白色，红色区与灰色区之间为缺血区。

　　植物样本：活组织呈玫瑰红色，死组织及无生命力的组织不着色。

　　三、TTC染色实验步骤（样本与实验目的不同步骤均有不同）

　　step1：取脑。可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定，所以较软，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。

　　Step2：——20度冰箱中速冻20分钟左右，便于切片。

　　Step3：切片。每隔2mm切一片，第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。（参考：张均田，主编。现代药理试验方法）。如果需计算面积的话，应切得均匀或用专门的脑槽。

　　Step4：将切片置于TTC中，常规浓度为2%，也有用1%或更低浓度的。

　　Step5：用锡箔纸盖住后，放入37C温箱15——30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液。也可以用将脑片放入多孔板，再滴入TTC，覆以圆形盖玻片使均匀染色。

　　Step6：取出切片后观察拍照。

　　四、TTC染色常见问题分析及原因解析

　　1、染色过深或过浅

　　染色时间、分化时间过长或不够，染色过程可在镜下控制，适当调整时间。

　　2、切片破碎

　　取材不当，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。或速冻时间不够，切片时组织过软，适当延长冷冻时间。